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原位末端凋亡检测（TUNEL）

发布日期：2022-02-21 来源：GM

1.服务介绍：

TUNEL 技术, 即脱氧核苷酸末端转移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介导的x2dU TP 缺口末端标记(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技术, 是目前原位检测细胞凋亡*敏感、快速、特异的新方法, 已广泛用于生物、医学研究领域。TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法.细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生,所以可以传达细胞凋亡的讯息.TdT为terminal deoxynucleotidyl transferase,此种酵素可以在没有DNA模板的情形下,连结核甘酸到DNA的3'-OH处.1992年,以色列科学家Gavrieli等人将TdT引为为标定DNA片段的一个酵素,自此衍生出TUNEL此项技术.TUNEL的好处是可以在细胞凋亡发生的早期,即可侦测到DNA片段的产生,并且可以直接使用在组织切片上,观察细胞凋亡发生的位置.所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法。

2.实验结果展示：

原位末端凋亡检测（TUNEL）.jpg

肿瘤组织TUNEL染色（显色法）

原位末端凋亡检测（TUNEL）2.jpg

肿瘤组织TUNEL染色（荧光法）

3.实验流程：

显色法：切片脱蜡--通透液通透--蛋白酶K--过氧化物酶封闭--孵生物标记素--终止液终止--加Steptavidin-HRP工作液--DAB显色--酒精脱水--二甲苯透明--中性树胶封片

荧光法：切片脱蜡--通透液通透--蛋白酶K--过氧化物酶封闭--孵生物标记素--洗涤后含DAPI封片

4.送样运输要求：

取材保持组织新鲜（组织块以小于2cm*1.5cm*0.3cm为宜），立即放入固定液（固定液用10%福尔马林液或4%多聚甲醛缓冲液，体积为组织块的10倍以上）中，避免干燥，4°冰箱保存。

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