服务热线：023-65426057
投诉邮箱：genemine@ 126.com
| 物料货号 | 中英文名 | 包装规格 | 市场价 |
| SMK-101 | KOD-Plus- Mutagenesis Kit | 20次份 | 1800 |
定点突变导入（置换、缺失、插入）
| 本品是利用KOD -Plus-高保真性，以Inverse PCR法进行位点特异性突变导入的试剂盒。本方法以质粒DNA为模板，使用反向设计的引物扩增质粒全长，进行突变导入。 |  |
●导入突变的多样性
在正常突变导入的基础上，可进行数10bp的插入(如Tag的插入)及数百bp的缺失突变。另外，也可通过导入不同的碱基突变来创建氨基酸的点突变文库。
●导入突变的可靠性
*大可得到95%的突变导入效率。另外，将PCR错配产生的2nd-site mutation(目的突变以外的突变)的可能性降到*低。已确认对*长11kb的质粒进行了突变导入。
●操作简便
转化之前只要3步的简单步骤。另外，无需准备磷酸化引物。
| 本试剂盒按以下顺序进行突变导入。 ①以Plasmid DNA为模板，使用突变导入引物进行Inverse PCR。如果想获得缺失突变体，在缺失区域的外侧设计引物。 接着，②向PCR产物中添加限制性内切酶Dpn I，消化模板质粒(Dpn I可以识别位点(GATC)中被甲基化的dA并进行酶切。因此，由于用一般的Dam甲基化酶(+)的大肠杆菌菌株(JM109、DH5α等)制备的质粒已被甲基化，Dpn I可以进行酶切)。*后，③直链质粒PCR产物通过自连进行环化，可用于大肠杆菌的转化。 |  |
1.缺失及插入突变时效率的比较
以7.3kb的质粒FLJ32066为对象，使用本产品与A公司的non-PCR法试剂盒，进行90个碱基的缺失及6×His对应的18个碱基的导入。结果显示：用其他公司的试剂盒难于进行的缺失及插入突变导入，使用本产品时可以高效率地获得突变体。
2. 目的外突变(2nd-site mutation)的插入频率评价
以试剂盒附带的对照质粒(4.3kb)为模板进行突变导入(以8循环进行PCR)，从得到的突变体中任意选取24个克隆，以2000bp长度分成几段分别进行测序。结果显示：使用本产品，在实际分析的总共48,000碱基中，只有一个目的以外的碱基发生突变。与A公司的non-PCR法试剂盒相比较，也是同等以上的效果。
(1)S. Arai et al., FEBS Letters, 581(29): 5649-5657(2007)
(2)Y. Torisu et al., Cancer Science,99(6): 1139-1146(2008)
(3)N. Shinmen et al., FEBS Letters.583(12): 1916-1922(2009)
联系电话：023-65426057
公司邮箱：genemine@ 126.com
联系地址：重庆市大渡口区天安数码城5栋7楼
技术部：李光志 / 15802394393
销售部：张琴 / 13140399886
原代细胞培养
CRISPR/Cas9细胞敲除/入
模式与转基因动物定制
动物疾病模型构建
分子生物学检测
...
专利服务
专利咨询
专利申请
专利检索
专利设计指导服务
文献翻译
公司活动
技术宣传
公司赞助
动物模型制作平台
细胞生物学平台
核酸蛋白平台
形态学观察平台
扫一扫关注公众号
Copyright @2021-2022 cqfht.com 重庆金麦生物技术有限公司 渝ICP备2021010685号 技术支持:云威科技 声明：本站部分内容素材来源于互联网，如有侵权请联系管理员删除，谢谢！
微信客服
扫码添加微信客服
