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RNA-directTM SYBR®Green Realtime PCR Master Mix
RNA-directTM SYBR®Green Realtime PCR Master Mix
产品简介:RNA-directTM SYBR®Green Realtime PCR Master Mix
产品价格:¥2000
商品货号:QRT-201

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简介:
物料货号中英文名包装规格市场价
QRT-201RNA-directTM SYBR®Green Realtime PCR Master Mix0.5ml× 5支2000
QRT-201BRNA-directTM SYBR®Green Realtime PCR Master Mix(0.5ml× 5支) ×59200
QRT-201CRNA-directTM SYBR®Green Realtime PCR Master Mix(0.5ml× 5支) ×1016800

用途


Realtime RT-PCR


说明


Tth DNA polymerase是在Mn2+存在下,具有很强的逆转录活性的独特的酶,在单一反应体系内可进行cDNA的合成及PCR的连续反应。利用该特性,开发出单酶一步法定量PCR试剂盒,与在同一反应中使用RTase及Taq DNA polymerase的「两酶一步法」体系试剂相比,使用单酶时,*适反应条件的设定较容易,而且能够得到更高的分析效率。


 


特征


步法高量分析
本品以 RNA 为模板,能够在同一反应体系内进行定量PCR分析,非常适合于需要快速分析的多重检测体系。


特异性高
本品采用抗体法热启动,对控制非特异性扩增非常有效。


适用性广
探针法及SYBR® Green I 法都可以适用。


用于不同类型的仪器
因为含有参比染料(Passive reference),可适用于需要校正的检测仪器(如Applied Biosystems® StepOnePlusTM 等)。


可用于易于形成高级结构的 RNA 和高 GC 含量的模板
可用于使用玻璃毛细管型的检测仪器(如Roche Diagnostics公司的LightCycler® )。
逆转录反应在高温下进行,所以也适用于易于形成高级结构的模板RNA。而且,众所周知,Tth DNA polymerase对GC含量高的序列的扩增效率非常高,可有效检测GC含量高的目的片段。

 


实验例


1. 两步法体系(RTase + Taq)』关性的比较

通过以各种人组织来源的RNA为样品,对蛋白酶δ(PKCδ)的表达进行分析,比较了与使用一般的两步法的荧光定量PCR分析法的相关性。
黄色柱状图表示的是使用本产品的定量结果,左边是使用50ng、右边是使用200ng的Total RNA得到的结果。蓝色柱状图表示的是使用本公司高效率逆转录试剂盒「ReverTra Ace -α-®」[FSK-101]与Taq酶为基础的荧光定量PCR试剂「SYBR® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-」[QPK-212]组合的两步法体系检测的结果。

结果显示,使用一步法的本产品与两步法体系得到了相同的结果。



2. TaqMan® 探针法分析的性能比较

RNA-directTM 与两酶一步法(仪器:使用BioFlux公司的 Line Gene)
以mRNA为模板,与使用Taq+RTase混合型的A公司的试剂(两酶一步法体系)进行了比较实验。
以人培养细胞提取的mRNA(10n倍稀释系列(n=2))为模板,用TaqMan® 探针法对β-actin的mRNA进行检测(作100倍稀释,使用20μl反应液中含有5ng的Poly(A)+ RNA)。结果显示,使用RNA-directTM Realtime PCR Master Mix的反应中,即使使用A公司试剂推荐的反应条件,也会得到起峰早及直线性的良好结果。




3. SYBR® Green分析中直线性的讨论

RNA-directTM 与两酶一步法(仪器:使用ABI公司的PRISM® 7900HT)
以HeLa细胞来源的Total RNA(10n倍稀释系列(n=2))为模板,用SYBR® Green分析法检测β-actin的mRNA(作100倍稀释,使用20μl反应液中含有75ng的Total RNA)。
结果显示,与Taq+RTase混合型的B公司试剂盒相比,RNA-directTM SYBR® Green Realtime PCR Master Mix的反应中,至少可以在7个梯度的稀释系列中表示出高度相关性。



4. SYBR® Green分析法中性能的比较

RNA-directTM 与一酶一步法(仪器:使用Roche公司的 LightCyclerTM)
以人培养细胞提取的Poly(A)+RNA(10n倍稀释系列(n=2))为模板,用SYBR® Green分析法检测G3PDH 的mRNA (作100倍稀释,使用20μl反应液中含有5ng的Poly(A)+ RNA)。
结果显示,与同样使用Tth DNA Polymerase的C公司试剂相比,RNA-directTM SYBR® Green Realtime PCR Master Mix的检测中,起峰早、信号强以及检测灵敏度都得到了极大提高。






 

参考文献


T. W. Myers and D. H. Gelfand, Biochem.30: 7661-7666(1991)


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