科研试剂

用途

Realtime PCR

说明

KOD SYBR® qPCR Mix是使用KOD DNA polymerase（KOD）的SYBR® GreenⅠ检测体系进行荧光定量PCR的Master mix。由于KOD SYBR qPCR Mix是去除了3’→5’核酸外切酶活性（校正活性）的KOD exo（−）DNA polymerase和*适化buffer的组合、*大程度发挥了KOD的『高效合成能力』以及『不易受到粗样品的抑制』的特性，可稳定地用于各种用途的荧光定量PCR。   引物的Tm值以及扩增产物的Tm值计算请点击此处进入在线工具

特征

对GC含量高的目的片段很有效

对于GC含量70%以上，用以往产品难以扩增的目的片段，也可定量扩增。

图2. GC含量不均一的启动子区域的Realtime PCR(使用ABI StepOnePlus^TM )
已确认本试剂对易于形成二级结构的目的片段也能有效扩增。

可扩增长链目的片段（〜2kb）
KOD FX以及KOD-Plus-系列等通常用于PCR的引物可直接使用。由于长链目的片段也可扩增，扩大了引物的选择范围。

2kb以内的各种长度目的片段均可选择，因此可在大范围内进行融解曲线分析。可以选择引物二聚体的产生范围以外的扩增区域（短链区域），对于用end point法进行的多重分析、multiplex PCR有很好的效果。

适用于粗样品的分析
用植物裂解液、鼠尾碱裂解液等粗样品可直接检测。运用SYBR^® Green Ⅰ检测法，能简化繁琐复杂的多型分析及SNP分析。
①扩增长度不同的基因分型检测
通过改变两种扩增产物的扩增长度，只需引物的Tm值设计成不同，即可在单管中进行mouse tail的基因分型。（参照上一个特征）。

 图6. 从血液及口腔粘膜的检测(用ABI 7500 Fast)
(A) 表示ALDH2 SNP检测用引物。为了能在一管中进行基因型的分辨，引物设计时，在一条等位基因特异的引物上加了GC tail (下划线部分)，使扩增产物的融解温度（Tm值）产生差异。GC tail的添加使得融解温度大幅度上升，使用扩增长度在100bp以下。另外，该实验例中，将等位基因特异的引物3’端开始第2位碱基设为SNP位点(红色)、第3位碱基设计了错配(绿色)位点。
(B) 向20μl反应体系中添加5μl血液的稀释液或口腔粘膜的悬浊液，进行检测。结果显示，可以判定基因型。   

③使用粗样品进行检测
对于用以往使用Taq DNA polymerase的PCR试剂难以扩增的粗样品也可以进行检测分析。

高特异性
通过抑制引物二聚体等非特异性反应，在低拷贝区域也可进行广泛的定量检测。同时通过使用本公司荧光定量PCR用cDNA合成试剂盒「ReverTra Ace^® qPCR RT 系列」，可以进行稳定的检测。

适用于各种仪器
除了模块型仪器（也适用于Fast Mode），也适用于使用毛细管的高速循环仪。另外，由于另附了50×ROX reference dye，对需要passive reference的仪器也可以使用，适用于各种仪器的ROX浓度。 
  【可以使用的仪器例】

实验例

<用户使用的实验例>

使用KOD SYBR(R) qPCR Mix 部分发表的文章

实验例1：启动子附近序列的扩增

实验例2：基因组DNA的相对定量

实验例3：使用粗样品进行荧光定量PCR

实验例4：生物农药丝状菌的特异性检测及定量

实验例5：ChIP目的片段的有效扩增

参考文献

1) R.M. de Breuil et al., PCR Methods Appl., 3 : 57-59 (1993)

2) P.M. Holland et al., Proc. Natl.Acad. Sci. USA 88 : 7276-7280 (1991)

• 备注

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  本产品是得到Chakrabarti　Advanced Technology NewCo LLC.公司US7772383专利的授权进行销售的。