科研试剂

用途

●RT-PCR

说明

本产品是使用rTth DNA Polymerase 的单酶・一步法RT-PCR试剂盒。
采用了热启动法，可进行高灵敏度的检测。
在Mn²⁺存在的条件下，Tth DNA polymerase是具有逆转率活性的独特的酶，使用该酶，可在同一管内连续进行cDNA的合成反应及PCR。
本试剂是深受好评的一步法RT-PCR试剂盒「RT-PCR high -Plus- <<逆转录一次成功>>」的升级版，性能得到了极大提高，更加适用于各种用途。

实验例

1. 与本公司原来产品灵敏度的比较

使用阳性对照RNA^*与引物对，以约450bp人的G3PDH mRNA的区域为目的片段进行RT-PCR。

结果显示，RT-PCR Quick Master Mix与本公司原来的产品相比，灵敏度提高了100倍。

B: 空白对照
【样品】人的G3PDH mRNA^* (10⁶ ~ 10²拷贝/50μl反应体系)
*通过in vivo transcription法配制。
【引物】
Primer(F): 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3' (20mer)
Primer(R): 5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3' (20mer)
【循环条件】
90℃ 0:30 →60℃ 30:00 →94℃ 1:00
→ (94℃ 0:30 → 60℃ 0:30 → 72℃ 1:00) x 40循环→72℃ 1:00

2. 使用mRNA进行cdc2基因的检测

以人培养细胞来源的mRNA(5ng、0.5ng)为模板，以人的cdc2的ORF全长(约900bp)为目的片段进行RT-PCR。
cdc2基因编码细胞周期相关的蛋白质。
结果显示，用本公司原来的产品不能检测的目的片段，用RT-PCR Quick Master Mix进行反应时，得到了良好的扩增结果。

【引物】
Cdc2-F : 5'-CCATACCATTGACTAACTATGGAAGAT-3' (27mer)
Cdc2-R : 5'-GTCAGAAAGCTACATCTTCTTAATCTG -3' (27mer)
            
【循环条件】
90℃ 0:30 →60℃ 30:00 →94℃ 1:00
→(94℃ 0:30 → 60℃ 0:30 → 72℃ 1:00) x 40循环→72℃ 1:00

参考文献

1)T. M. Myers and D. H. Gelfand, Biochem., 30: 7661-7666(1991)