科研试剂

用途

Illumina公司NGS测序用文库的制备

说明

GenNext^® NGS Library Prep Kit可从片段化的双链DNA或PCR产物开始，制备illumina^® 公司NGS测序用文库。使用本产品，可简便且迅速地制备文库。

使用本品，对1 ng - 1μg 的双链DNA片段的末端进行修复及3’末端的加A反应后，与末端带T的Adapter进行连接。

Input的DNA量少，需要扩增文库时，可使用基因改良型KOD DNA polymerase开发的高保真性PCR酶，低偏差地扩增末端带有Adapter序列的文库。

特征

●简便且快速的操作流程

从末端修复及3’末端加A到Adapter连接操作都在同一个反应容器中进行。末端修复及3’末端加A进行15分钟，Adapter的连接需要15分钟即完成。文库扩增时使用退火10秒、延伸15秒的循环即可进行反应。

●范围较广的input量

对应较广范围的input量（1 ng - 1μg）进行的设计。

●低偏差的文库扩增

文库扩增时使用的Library Amplification Master Mix是使用基因改良型KOD DNA polymerase进行开发的高保真PCR酶。因GC不均导致的影响降到了*低、可均一地扩增各种片段。

实验例

1. NGS评价文库制备试剂盒

使用MiSeq（illumina公司）及MiSeq Reagent Kit v2（300 Cycles） （illumina公司）进行大肠杆菌基因组（1ug PCR Free或1ng 用12循环进行扩增）的NGS分析。文库的制备使用Library Preparation Kit (Code: LPK-101T)或  A公司文库制备试剂盒进行。文库数据为了与read数相等，进行down sampling, 各样品收集100万read数，进行分析。分析是使用CLC Genomics Workbench （QIAGEN公司/CLC bio）进行的。

结果显示，使用GenNext^® NGS Library Prep Kit比使用其他公司的试剂，得到了更好的mapping效率与更低的错误率。

2. 文库得率及分布的比较

以片段化处理过的人基因组DNA 1、10、100ng、大肠杆菌基因组DNA 1ug、以及100bp DNA Ladder 1、10ng开始，使用GenNext^® NGS Library Prep Kit或A公司文库制备试剂盒进行文库的制备。

Adapter是使用illumine 公司的Index Adapter, 文库的cleanup是使用Agencourt  AMPure  XP的试剂(Beckman Coulter)。

1ug没有扩增、1ng用11个循环、10ng用8个循环、100ng用5个循环进行扩增，文库size的分布用MultiNA^® （岛津生产公司）的产品进行确认。文库的得率用GenNext^® NGS Library Quantification Kit (Code: NLQ-101)进行确认。

<结果>

进行文库size的分布时，用本公司GenNext^® NGS Library Prep Kit和A公司试剂时，结果相同；低input量时，使用GenNext^® NGS Library Prep Kit，与使用A公司的试剂相比，可得到较高的得率。因为不管哪一种都是要提供给MiSeq，所以都得到了必需的4nM以上的得率。