科研试剂

用途

PCR

说明

KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶KOD -Plus-系列技术的基础上，应用了本公司新开发的「延伸增强剂」，保持了KOD -Plus-系列高保真性（约为Taq的80倍）的同时，通过抑制<停滞现象>，明显提高了对微量模板DNA、长目的片段的扩增效率。

特征

●可对微量模板DNA进行高保真・高效率的扩增

通过应用延伸增强剂技术，即便是微量模板DNA也可对目的基因进行高保真・高效率的扩增。同时本酶具备高保真性（约为Taq的80倍），可准确地对低拷贝数模板的目的基因进行扩增。

※PCR错配率是通过使用各种酶以人基因组DNA为模板扩增β-globin基因(2.4kb)，对PCR产物进行TA克隆后，对96个克隆进行测序分析，测得的结果。

●缩短了延伸时间<30sec./kb>（长目的片段更方便）

延伸时间从原产品的60sec./kb缩短到30sec./kb。对长目的片段的扩增更加方便。

●实现了各种引物同一循环条件

20mer以上的引物(Tm值>63℃)可先尝试2步法。循环条件无需探讨非常简便。（请参考基本反应条件）
*Tm值采用*邻近法(Nearest Neighbor method)计算得到的值。

●长目的片段的扩增
提高了延伸性，可对各种长度的目的片段进行扩增。已通过实验确认可对24kb的基因组DNA进行扩增。

●采用热启动法，提高了PCR性能

原理

KOD DNA polymerase具有强有力的3’→5’核酸外切酶活性（校正活性），可准确地对目的片段进行扩增，作为克隆用PCR酶获得了广泛的好评。 然而，高保真性PCR酶在20〜30循环以后，容易出现扩增无法持续的<停滞现象>。

KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶：KOD -Plus-系列技术的基础上，应用了本公司新开发的「延伸增强剂」，保持了KOD -Plus-系列高保真性（约为Taq的80倍）的同时，通过抑制<停滞现象>，明显提高了对微量模板DNA、长目的片段的扩增效率。

实验例

1. Total RNA的各种基因全长ORF的扩增

以HeLa细胞来源的Total RNA逆转录后得到的cDNA（Total RNA 50 ng相当）为模板， 对各种蛋白激酶的ORF（open reading frame）的全长扩增。反应根据各PCR酶的推荐条件进行了30个循环。结果可见，只有用KOD -Plus- Neo的情况下，所有的基因都能得到明亮的扩增产物，所有的ORF都能迅速地进行克隆。

2. β-globin基因上各种长度区域的扩增效率・延伸性的比较

以人基因组DNA（50ng）为模板，对各种长度的β -globin 基因进行扩增。反应按各PCR 酶的推荐条件，进行了30个循环。结果显示，只有用KOD -Plus- Neo 的情况下，17.5 kb 的片段能确认得到明亮的条带。 而且，17.5 kb 以下的片段，用KOD -Plus- Neo 的得率要高得多。

参考文献

1) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63 : 4504-4510 (1997)
2) H. Hashimoto et al., J. Biochem.(Tokyo), 125 : 983-986 (1999)
3) H. Mizuguchi et al., J. Biochem.(Tokyo), 126 : 762-768 (1999)
4) M. Nishioka et al., J. Biotechnol., 88 : 141-149 (2001)
5) H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol., 306 : 469-77 (2001)
6) T. Imanaka et al., J. Chin. Inst.Chem. Engrs., 32 : 277-288 (2001)