科研试剂

用途

PCR

说明

KOD FX Neo是在高成功率PCR酶KOD FX的基础上添加了「延伸增强剂」而开发的PCR酶。在保持高扩增效率的同时，进一步提高了对难扩增序列、微量模板DNA、长目的片段及粗样品的扩增效率。

特征

 ●特征1.　延伸性UP

・以基因组DNA为模板*大可扩增40kb的片段
・实现了30 sec/kb的高速循环（粗样品推荐1min/kb）
・*适用于高GC含量目的片段的扩增
此外，还适用于使用抗体的热启动法，可进行特异性良好的扩增。

●特征2.　对粗样品的扩增性能UP
・提高了对植物裂解液、小鼠尾巴的扩增效率
・降低了土壤成分、食品成分等的PCR抑制效果
・与基础版产品KOD FX一样，可对革兰氏阳性菌、酵母、霉菌等直接进行PCR

原理

KOD DNA Polymerase具有卓越的延伸性，同时对粗样品成分中的抑制物质有很强的抵抗力。
KOD FX就是利用这种特性而开发出来的高成功率PCR酶，该酶在难扩增序列及粗样品的扩增方面受到了广泛的好评。
然而，以KOD FX为代表的以往的PCR酶在20~30个循环以后，很容易出现扩增无法持续的<停滞现象>，PCR的功能无法完全发挥出来。

【KOD FX Neo】是在KOD FX的基础上，应用了本公司新开发的【延伸增强剂】技术，从而成功地抑制了<停滞现象>，进一步提高了对长目的片段、难扩增序列及粗样品等的扩增效率。

实验例

1. 扩增长度的比较

使用KOD FX Neo及以往的产品，以人基因组DNA为模板进行长链目的片段的扩增。结果显示，只有使用KOD FX Neo的情况下，才可以确认扩增40kb长的目的片段。另外，与以往产品相比，KOD FX Neo只需一半的延伸时间(30sec/kb) *。因此，可以极大地缩短反应时间。

*粗样品扩增时建议按1min/kb进行。

2. 检测灵敏度的比较

以人基因组DNA为模板进行检测灵敏度的比较。结果可见，与原产品相比，KOD FX Neo的灵敏度提高了约10倍。

3. 扩增的比较

以碱裂解法制备的鼠尾裂解液为样品，扩增3种小鼠的基因。结果可见，只有用KOD FX Neo才能得到良好的扩增。像这样，KOD FX Neo能够对样品进行直接PCR，可以省略掉繁杂的纯化过程。

使用96孔PCR板的鼠尾处理方法(碱裂解法)

将鼠尾(约3 mm)放入离心管中。
↓←添加50 mM NaOH 180μl，盖上盖子，用Vortex充分振荡
↓spin down（轻轻地振荡使液体落到管下部)
↓95℃, 10 min.孵育(使用Thermo cycler)
↓←添加1 M Tris-HCl (pH 8.0) 20μl，盖上盖子，用Vortex充分振荡
↓spin down（轻轻地振荡使液体落到管下部)
取0.5〜2μl上清(模板)添加到50μl反应体系中进行PCR反应

※鼠尾切片，请切得小一些，使之能够浸没在裂解液中。
※请注意热碱。
※处理后，鼠尾不会完全溶解。大约只能溶解鼠尾的表面。
※本方法，可使用1.5m的离心管。

4.腐殖酸添加实验

腐殖酸(humic acid)是存在于腐殖土及土壤中的红褐色或黑褐色有机物质，对PCR有抑制作用。
通常进行的DNA纯化过程中不能去除这种腐殖酸，因此，以环境、生态体系中的样品作为模板进行PCR非常困难。
这里，以人基因组DNA中混入腐殖酸为例，探讨了其对PCR的抑制作用。结果显示，KOD FX Neo对抗腐殖酸的能力*强。
因此，使用KOD FX Neo可以对环境、生态体系中的样品进行PCR。

※其他的实验例

实验例5: 植物裂解液的扩增

实验例6: 果酱(食品)添加实验

实验例7: 用混合肥料(堆肥)进行宏基因组分析

实验例8: 小鼠指甲直接PCR

实验例9:判定 ES细胞的基因重组