1.服务介绍:
缺血再灌注是器官移植、休克、动脉搭桥后普遍存在的问题。肾脏是发生缺血*常见的器官之一,尤其是肾移植,不可避免的要经历不同程度的缺血,肾脏缺血再灌注是急性肾衰的常见原因。对麻醉动物的肾动脉进行阻断和再通后,可引起肾脏缺血后再灌注损伤。在缺血再灌注过程中,钙超载、线粒体能量合成障碍、氧的自由基增多等因素造成肾小管内皮组织脱落,肾组织的结构破坏进而使肾脏功能发生障碍。
2.实验结果展示:
实验过程:
正常对照H&E染色: 模型组H&E染色:
3.实验流程:
动物麻醉后,腹部朝上摆放,用医用胶布固定四肢,电动刮毛刀褪去腹部毛发,70%酒精对腹部表皮进行消毒。从箭突末端沿腹中线向下剪开3cm切口,暴露腹腔。注意:切口不能超过箭突,该处皮肤与肌肉中汇集大量血管,破损会导致动物大量失血。用止血钳分别夹住切口两侧和箭突并拨开,尽量暴露腹腔。Tips:可用纱布垫高止血钳,以抬高腹壁,便于观察。用生理盐水湿润纱布和棉签。取两块湿润的纱布置于切口右侧(动物左侧)。用湿润的棉签非常轻柔地将小鼠的肠道从腹腔从推至旁边的纱布上,使门静脉充分地暴露。再取一块湿润的纱布覆盖肠道,以防干燥。用剪刀仔细地剪开方肝叶与左肝叶之间的联结组织,以更好地暴露**肝门(门静脉,肝动脉,胆管)。必要时,需将中肝叶和左肝叶往膈膜方向铺开,以方便观察左肝叶与方肝叶的联结。肝门中找到右肝叶分支,并在右肝叶分支上方用血管夹夹闭门静脉,肝动脉和胆管。夹闭后,中肝叶和左肝叶(体积约占整个肝脏70%)的颜色会很快由赤褐色变成苍白。若中肝叶和左肝叶颜色没有发生明显变化,则取下夹子重新夹闭。夹子放置的深度很重要。肝动脉的深度比门静脉要深。成功完成血管夹放置后,用湿润的棉签轻轻的将肠道推回腹腔内,向腹腔内滴加500μl 10U/ml肝素钠生理盐水溶液,用生理盐水湿润的纱布覆盖切口。将动物转移到加热灯或加热垫下,是动物体温维持在37℃。在缺血过程中紧密看护动物,防止动物体温下降,并确保覆盖的纱布保湿湿润。期间为防止动物苏醒可向腹腔滴加少量麻醉剂(50μl)。实验设定的缺血时间结束后,轻轻将血管夹取出,向腹腔内滴加500μl生理盐水,以补充手术过程中的体液损失。取出血管夹后,对切口进行双层缝合。实验设定的再灌注时间结束时处死动物采样保存。
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